起发 脂质过氧化探针C11-BODIPY 581/591

　　一、 化学结构：

　　二、 检测原理：

　　脂质过氧化探针C11-BODIPY 581/591是一种新型的对 Lipid ROS 高选择性、高灵敏的脂质过氧化探针，与其他 ROS 捕获探针不同之处在于，具有好的亲脂性可以快速入膜，随后可以选择性的对细胞内和细胞膜中的脂质过氧化(Lipid ROS)进行捕获，并在氧化后仍保持亲脂性，不会离开脂质膜，该过程同时伴随荧光信号变化。多用于荧光显微镜、流式细胞分析等对 Lipid ROS 的可视化监测。本产品 结构中多不饱和丁间二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后，其荧光发射峰从 590 nm偏移至 510 nm。

　　实验步骤

　　1. 样品溶解：

　　商品开封后，离心机轻甩；随后加入适量 DMSO 进行溶解，溶解度至少可达 25mg/mL。溶解后建议分装-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，防止吸潮。

　　【注】：样品轻甩目的是为了避免痕量的探针吸附管壁损失样本。

　　2. 样品使用：

　　1) 流式细胞分析：

　　悬浮细胞：800 g 离心 5 min 收集细胞沉淀；随后 PBS 洗涤细胞两遍。

　　贴壁细胞：弃培养液，用常温 PBS 或培养液轻洗细胞 2 次，随后yi酶消化，800g 离心 5 min 收集细胞沉淀，随后 PBS 洗涤细胞两遍，每个样本收集 1~5 ×105 个细胞。(注意：操作过程中轻柔吹打细胞， 消化时间不宜过长，剧烈吹打或yi酶消化过度会影响实验结果)

　　本产品 用于脂质过氧化检测的推荐浓度为终浓度 5μM；配制方法：用新鲜空白培养液配制终浓度为 5μM 的本产品染色液待用，DMSO 含量≤5‰。

　　(注意：该步操作建议在消化细胞前准备好，以免细胞消化后久置影响实验结果)

　　将事先配置好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中，推荐体积为 500μL，随后置于 37℃孵箱， 染色 30min，期间 5-10min 间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。

　　染色结束后，800 g 离心 5 min，弃上清，随后用PBS 清洗细胞 2 次，加入 200μLPBS 重悬细胞用于流式分析。

　　2） 原位成像：

　　接种适当密度的细胞于 20mm 规格的盖玻片上（也可用共聚焦小皿替代），给予实验药物处理适当时间后，吸去培养液，用 PBS 洗涤细胞一遍加入 500 μL 配制好的脂质过氧化染色液，于 37℃染色 30min；（配制方法参考流式分析中的染色液配制）弃培养液，PBS 洗涤细胞两遍后荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在 1 h 之内完成检测。

　　3）检测条件：

　　该分子探针在还原状态下最佳激发波长为 581 nm, 发射为 591nm；被 Lipid ROS 氧化后最佳激发波长为 500 nm，发射在 510nm。因此，在流式分析中检测通道为 FL1-A；激光共聚焦检测：氧化态激发波长可选488nmFITC）通道；还原态激发波长可选 561 nm（TRITC）通道。

　　实验案例分析

　　流式分析实验范例：

　　使用本试剂检测 10 μM RSL3（铁死亡经典诱导剂）处理 A549 细胞 24 h 后的细胞脂质过氧化水平的流式检测

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